മോളിക്കുലാർ ജൈവ ഗവേഷണ രീതികൾ അവരുടെ ഉപയോഗം

മോളിക്കുലാർ ജൈവ ഗവേഷണ രീതികൾ ആധുനിക വൈദ്യശാസ്ത്രം, ഫോറൻസിക് സയൻസ്, ബയോളജി ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു. ഡി.എൻ.എ ലീഗ് പഠിക്കാൻ പുരോഗതിയുടെയും നന്ദി, വ്യക്തി തുടങ്ങിയവ ആസിഡുകൾ ഒരു മിശ്രിതം ഉദ്ദേശിക്കുന്നത് നുച്ലെഇച് ആസിഡ് തിരിച്ചറിയാൻ, ജൈവ എന്ന ജീനോം പര്യവേക്ഷണം ചെയ്യാൻ ക്വറി നിർണ്ണയിക്കാൻ കഴിയും

മോളിക്കുലാർ-ജൈവ രീതികൾ. അത് എന്താണ്?

തിരികെ ശാസ്ത്രജ്ഞന്മാരുടെ ൭൦-൮൦സ് ൽ പേര് ആദ്യമായി മനുഷ്യ ജീനോം. ഈ സംഭവം ജനിതക എഞ്ചിനീയറിംഗ് ആന്റ് മോളിക്യുലർ ബയോളജി വികസനത്തിന് വികാരം. ഡിഎൻഎ സ്വത്തുക്കളും ലീഗ് പഠനം അത് രോഗം രോഗനിർണയം, പഠനം ജീൻ ഉദ്ദേശ്യം ഈ നുച്ലെഇച് ആസിഡുകൾ ഉപയോഗിക്കാൻ ഇപ്പോൾ അവസരമുണ്ട് വന്നിട്ടില്ല.

ഡി.എൻ.എ ലീഗ് തയ്യാറാക്കൽ

മോളിക്കുലാർ ജൈവ ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് രീതികൾ പലപ്പോഴും ഈ: മെറ്റീരിയൽ തുടങ്ങുന്ന ആവശ്യമായ നുച്ലെഇച് ആസിഡ്. ജീവനുള്ള ജീവികളുടെ കോശങ്ങൾ നിന്ന് ഇവയുടെ തിരഞ്ഞെടുക്കാൻ പല വഴികൾ ഉണ്ട്. ഓരോ അതിന്റെ ഗുണങ്ങളും ദോഷങ്ങളുമുണ്ട് ഉണ്ട്, ശുദ്ധമായ രൂപത്തിൽ നുച്ലെഇച് ആസിഡുകൾ വേർതിരിച്ചിരുന്ന ഒരു രീതി തിരഞ്ഞെടുക്കുമ്പോൾ അത് കണക്കാക്കാം.

മര്മുര് പ്രകാരം ഡിഎൻഎ 1. തയ്യാറാക്കൽ. രീതി, മദ്യം പദാർത്ഥത്തിന്റെ മിശ്രിതം ചികിത്സക്കായി അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു ഫലമായി ശുദ്ധമായ ഡിഎൻഎ പ്രെചിപിതതെസ്. ഈ രീതി അഭാവമാണ് മറിക്കുന്നു ലഹരിവസ്തുക്കൾ ഫിനോൾ ആൻഡ് ഛ്ലൊരൊഫൊര്മ് ഉപയോഗം ആണ്.

ബൂം ന് ഡിഎൻഎ 2. ഒറ്റപ്പെടൽ. ഇവിടെ ഉപയോഗിക്കുന്ന പ്രധാന സമ്പത്തു - ഗുഅനിദിനെ ഥിഒച്യനതെ (ഗുസ്ച്ന്) ആണ്. അത് നീക്കപ്പെടുന്നു പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്ന ദെഒക്സയ്രിബൊനുച്ലെഇച് ആസിഡ് നിന്ന് അത് പിന്നീട് ഒരു പ്രത്യേക ബഫർ മുഖാന്തരം ലഭിക്കും പ്രത്യേക ഊര്ജപരിവര്ത്തനക്ഷമതയുള്ളവയുമാണ്, ന്. എന്നാൽ ഗുസ്ച്ന് - ടിസിപി ഒരു ഇംഹിബിതൊര്, ആ പോലും ഒരു ചെറിയ ഭാഗം ഡിഎൻഎ നിക്ഷേപിക്കുകയും നേരിടുമ്പോഴാണ് നുച്ലെഇച് അമ്ലങ്ങളുമായി പ്രവർത്തിക്കുമ്പോൾ പ്രധാനപ്പെട്ട ആണ് പൊല്യ്മെരസെ ശൃംഖലാപതിപവര്ത്തനം, ഗതി സ്വാധീനിക്കാൻ കഴിയും.

മാലിന്യങ്ങളെ 3. തെളിഞ്ഞ. രീതി തന്മാത്രകൾ സ്വയം ദെഹൊക്സിരിബൊനുക്ലെഇനൊവൊയ് ആസിഡും മാലിന്യങ്ങളെ നിക്ഷേപിക്കുകയും അല്ല എന്ന് മുൻ നിന്ന് വ്യത്യസ്തമാണ്. ഇത് ചെയ്യുന്നതിന്, അയോൺ വാണിഭക്കാരെ ഉപയോഗിക്കുക. നിരാശരാക്കി എല്ലാ പദാർത്ഥങ്ങളും നല്കാമോ എന്നതാണ്.

4. മാസ് സ്ക്രീനിംഗ്. നിങ്ങൾ ഡിഎൻഎ തന്മാത്ര ഘടന, ചില സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾ ലഭിക്കാൻ ആവശ്യം കൃത്യമായ വിവരങ്ങൾ തന്നെ ആവശ്യമില്ല ഈ രീതി കേസുകളിൽ ഉപയോഗിക്കുന്നു. കാരണം ഡിറ്റർജന്റുകൾ, പ്രത്യേകിച്ച് അല്കലിഎസ് കൈകാര്യം ചെയ്യുമ്പോൾ നുച്ലെഇച് ആസിഡ് ഘടന കേടുപാടുകൾ കഴിയും എന്നതാണ്.

ഗവേഷണ രീതികൾ വർഗ്ഗീകരണം

ഗവേഷണ എല്ലാ തന്മാത്രാ-ജൈവ രീതികൾ മൂന്നു പ്രധാന തരംതിരിക്കപ്പെടുന്നു:

1. അംപ്ലിഫിചതിഒന് (എൻസൈമുകൾ ചതുരശ്രയടി ഉപയോഗിച്ച്). ഡയഗ്നോസ്റ്റിക് രീതികൾ പല ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നുണ്ട് ഏത് പൊല്യ്മെരസെ ശൃംഖലാപതിപവര്ത്തനം, - ഈ പി.സി.ആർ. ഉൾപ്പെടുന്നു.

2. നെഅംപ്ലിഫികത്സിഒംംയെ. രീതികൾ ഈ ഗ്രൂപ്പ് നുച്ലെഇച് ആസിഡ് മിശ്രിതങ്ങൾ പ്രവർത്തനങ്ങളിൽ നേരിട്ട് ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. ഉദാഹരണങ്ങൾ 3 തരത്തിലുള്ള മായിച്ചുകളയുന്നു ഉണ്ട്, അതാതിടത്തു സസ്യപാരമ്പര്യ, മുതലായവ

3. ഒരു പ്രത്യേക ഡി.എൻ.എ അല്ലെങ്കിൽ എ അന്വേഷണം നിയന്ത്രിക്കുന്നു അന്വേഷണം തന്മാത്ര, നിന്ന് സിഗ്നൽ അംഗീകാരം അടിസ്ഥാനമാക്കി രീതികൾ. ഉദാഹരണം - സസ്യപാരമ്പര്യ സിസ്റ്റം ഹ്യ്ബ്രിദെ ക്യാപ്ചർ സിസ്റ്റം പരിഹാരം (ഹ്ച്൨).

തന്മാത്രാ ജൈവ ഗവേഷണ രീതികൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന എൻസൈമുകൾ

പല തന്മാത്രാ രോഗ നിർണ്ണയ വിദ്യകൾ എൻസൈമുകൾ വിശാലമായ ഉപയോഗം ഉൾപ്പെട്ടിരിക്കുന്നത്. താഴെ ഏറ്റവും പലപ്പോഴും ഉപയോഗിക്കുന്നു:

1. നിയന്ത്രണം രാസാഗ്നിയുടെ - ആവശ്യമായ ഭാഗങ്ങൾ ഡിഎൻഎ തന്മാത്ര "വെട്ടി".

2. ഡിഎൻഎ പൊല്യ്മെരസെ - ഇരട്ട-കുടുങ്ങിയ ദെഒക്സയ്രിബൊനുച്ലെഇച് ആസിഡ് തന്മാത്ര സ്യ്ംഥെസിജെസ്.

3. റിവേഴ്സ് ത്രംസ്ച്രിപ്തസെ (റിവേഴ്സ് ത്രംസ്ച്രിപ്തസെ) - ഒരു എ ടെംപ്ലേറ്റ് നിന്ന് ഡിഎൻഎ ഓര്മ്മിക്കുന്നതു ഉപയോഗിച്ച്.

4. ഡിഎൻഎ ലിഗസെ - ഏകകോശ തമ്മിലുള്ള ഫൊസ്ഫൊദിഎസ്തെര് ബോണ്ടുകൾ രൂപപ്പെട്ടതിനെ ഉത്തരവാദി.

5. എക്സൊനുച്ലെഅസെ - ദെഒക്സയ്രിബൊനുച്ലെഇച് ആസിഡ് തന്മാത്രകൾ അവസാനം ഭാഗങ്ങൾ നിന്ന് ഏകകോശ നീക്കം.

സംഭവസ്ഥലത്തേക്കു - ഡി.എൻ.എ അംപ്ലിഫിചതിഒന് അടിസ്ഥാന രീതി

പൊല്യ്മെരസെ ശൃംഖലാപതിപവര്ത്തനം (സംഭവസ്ഥലത്തേക്കു) ആധുനിക മോളിക്യുലർ ബയോളജി വ്യാപകമായി ഉപയോഗിക്കുന്നു. ഈ രീതി, അതിൽ ഒരു ഡിഎൻഎ തന്മാത്ര പകർപ്പുകൾ ഒരു വലിയ എണ്ണം (ചിരസ്ഥാപിതമായ തന്മാത്ര) ലഭിക്കും.

സംഭവസ്ഥലത്തേക്കു പ്രധാന പ്രവർത്തനങ്ങൾ:

- രോഗങ്ങൾ രോഗനിർണയം;

- ഡി.എൻ.എ സെഗ്മെന്റുകൾ ക്ലോണിങ്, ജീൻ.

പ്രാരംഭ DNA, ഒരു ഥെര്മൊസ്തബ്ലെ ഡിഎൻഎ പൊല്യ്മെരസെ (തക് അല്ലെങ്കിൽ പ്ഫു), ദെഒക്സയ്രിബൊനുച്ലെഒതിദെ phosphates (നൈട്രജൻ പീഠങ്ങളുടെ ഉറവിടങ്ങൾ), പ്രിമെര്സ് (2 ധര്മത്തിന്റെ 1 ഡിഎൻഎ തന്മാത്ര) ഒപ്പം തന്നെ നടത്താൻ വേണ്ടി ഒരു ബഫർ സിസ്റ്റം: പൊല്യ്മെരസെ ശൃംഖലാപതിപവര്ത്തനം നടപ്പിലാക്കുന്നതിനായി താഴെ പറയുന്ന ഘടകങ്ങൾ ആവശ്യമാണ് എല്ലാ പ്രതികരണങ്ങൾ.

ദെനതുരതിഒന്, ധര്മത്തിന്റെ അംനെഅലിന്ഗ് ആൻഡ് കോണീയ: സംഭവസ്ഥലത്തേക്കു മൂന്നു ഘട്ടങ്ങൾ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.

1. ദെനതുരതിഒന്. 94-95 ഡിഗ്രി താപനില സെൽഷ്യസ് ഡിഎൻഎ രണ്ടു ചങ്ങല തമ്മിലുള്ള ഹൈഡ്രജൻ പൊട്ടിച്ചു പ്രൊശൊദിത്, അതിന്റെ ഫലമായി നാം രണ്ട് സിംഗിൾ കുടുങ്ങി തന്മാത്രകൾ ലഭിക്കും.

2. പ്രിമെര്സ് അംനെഅലെദ്. 50-60 ഡിഗ്രി താപനില സെന്റിഗ്രേഡ് ചൊംപ്ലെമെംതരിത്യ് തരം അനുസരിച്ച് ഒറ്റ-കുടുങ്ങിയ നുച്ലെഇച് ആസിഡ് തന്മാത്രകളുടെ അറ്റത്ത് കരാറിൽ പ്രിമെര്സ് സംഭവിക്കുന്നത്.

3. വൈകി. 72 ഡിഗ്രി താപനില മകൾ ഇരട്ട കുടുങ്ങിയ ദെഒക്സയ്രിബൊനുച്ലെഇച് ആസിഡ് തന്മാത്രകൾ കൃത്രിമമായി ആണ്.

ഡിഎൻഎ സിക്വൻസിങ്

മോളിക്കുലാർ ജൈവ ഗവേഷണ രീതികൾ പലപ്പോഴും ദെഒക്സയ്രിബൊനുച്ലെഇച് ആസിഡ് ഒരു തന്മാത്ര ൽ ഏകകോശ കാര്യങ്ങളാണ് അറിവ് ആവശ്യമാണ്. നിർണ്ണയിക്കാൻ ജനിതക മെസെജായിരുന്നു. ഭാവിയിൽ തന്മാത്രാ ഡയഗ്നോസ്റ്റിക്സ് മനുഷ്യ സീക്വന്സിലുള്ള നിശ്ചയദാർഢ്യമുള്ളതായി നേടി അറിവിൻറെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ ചെയ്യും.

സിക്വൻസിങ് താഴെ തരത്തിലുള്ള:

• മക്സഅമ്-ഗിൽബർട്ട് പ്രകാരം സിക്വൻസിങ്;
• സാങർ സിക്വൻസിങ്;
• പ്യ്രൊസെകുഎന്ചിന്ഗ്;
• നനൊപൊരൊവൊഎ സിക്വൻസിങ്.